Дипломная работа на тему: Изучение иммунного ответа амфипод на полиэлектролитные микрокапсулы с полиэтиленгликолевым покрытием с использованием первичной культуры гемоцитов

План работы:

ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1. Иммунная система ракообразных 6
1.1.1. Гуморальный иммунный ответ ракообразных 6
1.1.1.1. Детерминант-распознающие рецепторы 6
1.1.1.2. Лектины 7
1.1.1.3. Антимикробные пептиды ракообразных 8
1.1.1.4. Фенолоксидазная система. Меланизация 9
1.1.2. Клеточный иммунный ответ ракообразных 11
1.1.2.1. Гемоциты ракообразных 11
1.1.2.2. Гемоциты амфипод 12
1.1.2.3. Фагоцитоз 13
1.1.2.4. Инкапсуляция 14
1.2. Первичная культура гемоцитов ракообразных 14
1.3. Полиэлектролитные микрокапсулы 15
1.4. Покрытия для повышения биосовместимости имплантов 16
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 18
2.1. Объекты исследования 18
2.2. Методика сбора и содержания амфипод 19
2.3. Методика отбора гемолимфы 20
2.4. Выделение гемоцитов амфипод 20
2.5. Методика содержания гемоцитов амфипод 21
2.6. Методы оценки жизнеспособности гемоцитов 22
2.7. Методика подсчёта гемоцитов в камере Горяева 23
2.8. Методика окрашивания гемоцитов Ru(Phen)3 24
2.9. Одномерный электрофорез в полиакриламидном геле 24
2.10. Подготовка полиэлекторлитных микрокапсул 25
2.11. Анализ агрегации гемоцитов в присутствии чужеродных тел 26
2.12. Подготовка гистологических срезов 27
2.13. Статистическая обработка данных 27
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 28
3.1. Характеристика клеточных элементов гемолимфы E. verrucosus 28
3.1.1. Морфологическая характеристика гемоцитов E. verrucosus 28
3.1.2. Определение мембранного резерва гемоцитов 30
3.1.3. Определение концентрации гемоцитов разных размерных групп амфипод 31
3.2. Подбор параметров выделения гемоцитов 31
3.3. Подбор параметров содержания гемоцитов in vitro 33
3.3.1. Влияние концентрации ФБС на жизнеспособность культуры 34
3.3.2. Жизнеспособность культуры гемоцитов при разных температурных режимах 35
3.3.3. Анализ возможности объединения гемоцитов разных особей одного вида 36
3.4. Взаимная реакция гемоцитов разных видов амфипод 37
3.5. Чувствительность полученной первичной культуры гемоцитов к чужеродным объектам 39
3.5.1. Реакция гемоцитов на микрошарики декстрана 39
3.5.2. Реакция гемоцитов на клетки дрожжей 40
3.5.3. Реакция гемоцитов на полиэлектролитные мкрокапсулы с полиэтиленгликолевым покрытием 44
3.6. Анализ содержания гемоцианина в гемоцитах амфипод 46
3.7. Анализ гистологических срезов после введения полиэлектролитных микрокапсул in vivo 48
3.8. Заключение 49
ВЫВОДЫ 51
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 52
ПРИЛОЖЕНИЕ 62