Дипломная работа на тему: Исследование филогеографии и филогенетических отношении популяций Anemone baicalensis Turcz. с использованием молекулярно-генетических маркеров

План работы:

ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 5
1.1. Характеристика видового комплекса Anemone baicalensis Turcz. Aggr 5
1.1.1. Систематика, ботанико-экологическая характеристика и географическое распространение A. baicalensis s.l 5
1.1.2. Проблема установления систематического статуса комплекса видов A. baicalensis 9
1.1.3. Исследование полиморфизма плоидности для установления родства видов A. baicalensis aggr 10
1.1.4. Исследования A. baicalensis Turcz. aggr. с применением молекулярно- генетических методов анализа 12
1.2. Молекулярно-генетические маркеры в филогенетических и популяционных исследованиях высших растении 13
1.3. Маркеры хлоропластной ДНК 15
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 16
2.1. Сбор и фиксация материала 16
2.2. Выделение тотальной ДНК 16
2.3. Спектрофотометрический анализ нуклеиновых кислот 17
2.4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 17
2.5. Электрофорез в агарозном геле, выделение и очистка фрагментов ДНК 18
2.6. Секвенирование по методу Сэнгера и капиллярный электрофорез 19
2.7. Обработка и анализ результатов 19
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 20
3.1. Выделение тотальной ДНК из листьев A. baicalensis, оценка ее качества 20
3.2. Подбор количества и оптимизация чистоты препаратов тотальной ДНК у A. baicalensis для дальнейшей амплификации 20
3.3. Анализ нуклеотидных последовательностей региона, включающего фрагмент гена trnL и межгенный спейсер trnL-trnF, у A. baicalensis 21
3.3.1. Определение условий амплификации региона trnL и trnL-trnF 21
3.3.2. Определение нуклеотидных последовательностей и характеристика амплифицированного региона trnL 22
3.3.3. Полиморфизм региона trnL у Anemone baicalensis 23
3.3.4. Определение нуклеотидных последовательностей и характеристика амплифицированного региона trnL-trnF у Anemone baicalensis 24
3.3.5. Полиморфизм trnL-trnF региона у Anemone baicalensis 26
3.3.6. Филогенетический анализ видов с использованием последовательностей trnL-trnF 27
3.4. Анализ нуклеотидных последовательностей межгенного спейсера rbcL-atpB у A. baicalensis 29
3.4.1. Определение условий амплификации rbcL-atpB 29
3.4.2. Определение нуклеотидных последовательностей и характеристика амплифицированного фрагмента atpB-rcbL 30
3.4.3. Полиморфизм atpB-rcbL региона у A. baicalensis 32
3.4.4. Филогенетический анализ видов с использованием последовательностей atpB-rcbL 32
ВЫВОДЫ 34
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 35