Дипломная работа на тему: Анализ изменений спектральных свойств и термической устойчивости реакционных центров пурпурной бактерии после генетической модификации

План работы:

ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1. Реакционный центр пурпурной бактерии. Строение. Расположение в мембране 6
1.2. Перенос электрона в реакционном центре 13
1.3. Система для мутагенеза реакционного центра 14
1.4. Наиболее значимые мутации 17
1.4.1. Мутации, затрагивающие молекулы воды 17
1.4.2. Замещение кофакторов переноса электрона в реакционном центре Cereibacter sphaeroides при помощи методов генной инженерии 18
1.4.3. Удаление кофакторов переноса электронов 20
1.4.4. Направленные мутации вблизи хинонов 22
1.4.5. Мутации, направленные на изучение эволюционной связи между бактериальными реакционными центрами и фотосистемой 2 24
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 26
2.1. Материалы 26
2.2. Методы молекулярной биологии 28
2.2.1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 28
2.2.2. Выделение плазмид методом щелочного лизиса 30
2.2.3. Горизонтальный электрофорез в агарозном геле 31
2.3. Методы микробиологического и биохимического анализа 32
2.3.1. Трансформация штамма E.coli плазмидой, несущей фрагмент ДНК с мутацией методом электропорации 32
2.3.2. Выращивание пурпурных бактерий 33
2.3.3. Выделение реакционных центров 34
2.3.4. Измерение спектров поглощения при комнатной температуре 36
2.3.5. Регистрация дифференциальных (свет-минус-темнота) спектров поглощения 36
2.3.6. Пигментный анализ реакционных центров 37
2.3.7. Анализ термостабильности мутантных реакционных центров 38
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 39
3.1. Получение рекомбинантного штамма C. sphaeroides, несущего полигистидиновую метку 40
3.2. Спектры поглощения 41
3.3. Дифференциальные (свет минус темнота) спектры поглощения 42
3.4. Пигментный анализ 43
3.5. Изучение терммостабильности реакционных центров дикого типа и L(L131)H+L(M160)H+F(M197)H 44
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 47
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 50