Дипломная работа на тему: Влияние азотного голодания на количество и состав липидов микроводоросли С-1210 IPPAS

План работы:

ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР 7
1.1. Особенности биодизельного топлива 7
1.2. Биологические особенности микроводорослей 14
1.3. Получение биомассы 15
1.4. Клеточная стенка микроводорослей 16
1.5. Липиды микроводорослей 18
1.6. Жирные кислоты микроводорослей 18
1.7. Пигменты микроводорослей 21
1.7.1. Фикобилины 21
1.7.2. Хлорофилл 22
1.7.3. Каротиноиды 22
1.8. Рынок пигментов 25
1.9. Экстремофильные микроводоросли 26
1.10. Метаболизм жирных кислот и ацилглицеринов 29
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 32
2.1. Экспериментальные условия культивирования 32
2.2. Измерение скорости роста 33
2.3. Определение количества суммарных липидов в клетках и их жирнокислотного состава 34
2.3.1. Отбор и фиксация проб для последующего анализа ЖК-состава суммарных липидов 34
2.3.2. Синтез метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК) суммарных липидов 35
2.3.3. Газохроматографическое разделение и анализ смеси МЭЖК 35
2.3.4. Расчёт количественного содержания суммарных липидов (СЛ) в 1 г сухой массы клеток микроводорослей 36
2.4. Экстракция липидов по методу Фолча 37
2.5. Выделение ТАГ и ПЛ с помощью препаративной тонкослойной хроматографии 38
2.6. Разделение полярных липидов методом двумерной препаративной тонкослойной хроматографии 38
2.7. Идентификация полярных липидов методом масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением 39
2.8. Получение 1,2 - ДАГ и 2-МАГ из ТАГ методом энзиматического гидролиза для установления их позиционно-видового состава 40
2.9. Вестерн-блот анализ содержания фотосинтетических белков 41
2.9.1. Экстракция белков 41
2.9.2. Электрофоретическое разделение белков и вестерн-блот анализ 42
2.10. Выделение геномной ДНК 43
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 46
3.1. Идентификация исследуемой микроводоросли 46
3.2. Параметры роста культуры клеток микроводоросли С-1210 50
3.3. Особенности изменения ультраструктуры клеток микроводоросли С-1210 в процессе культивирования 51
3.4. Изменение количества суммарных липидов и их ЖК-состава в клетках микроводоросли С-1210 в процессе культивирования 52
3.5. Азотное голодание и его влияние на липидный и ЖК-состав клеток микроводорослей 55
3.6. Особенности ультраструктуры клеток, культивируемых в условиях дефицита азота 57
3.7. Состав нейтральных липидов клеток С-1210, культивируемых в условиях дефицита азота 58
3.8. Изучение структуры клеток С-1210 с помощью флуоресцентной микроскопии 61
3.9. Анализ жирнокислотного состава ТАГ в sn-2-положении 63
3.10. Особенности полярных липидов клеток микроводоросли С-1210 65
3.11. Особенности полярных липидов клеток микроводоросли С-1210 в условиях азотного голодания 68
3.12. Вестерн-блот анализ 73
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 76
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 78
ПРИЛОЖЕНИЕ 98